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              技術與支持

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              流式常見問題解析(一)熒光素的選擇

              近年來,隨著流式技術的不斷發展,這項技術已經成為臨床醫生、免疫學研究人員和細胞學研究人員必不可少的工具。越來越多的客戶向我們咨詢流式產品,實驗操作以及出現的各種問題,其中一開始大家問的最多的問題就是如何選擇不同熒光素的抗體。下面,我就對這個問題進行一下簡單的介紹。

              一 流式細胞儀配備激光器

              目前市場上應用的流式細胞儀品牌較多,應用也各不相同。但是其配備的激光器大概分為以下幾種:

              藍色激光器 488nm,紅色激光器 640nm,UV,紫色激光器405nm,黃綠色激光器561nm。

              二 常見熒光素的種類和特性

              FITC(Fluorescein)又稱異硫氰酸熒光素,其標記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細胞儀;FITC的最大發射波長為525nm。

              PE(R-Phycoerythrin)又稱藻紅蛋白,有R-PE和RD1的別稱,其標記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細胞儀;PE的最大發射波長為575nm。

              PE-Cy5(TRI-COLOR,TC)又稱TRI-COLOR或TC,是由PE和Cy5組合而成的Tandem熒光素;其標記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細胞儀;PE-Cy5的最大發射波長為670nm。

              PerCP(Peridinin-Chlorophyll-ProteinComplex)多甲藻黃素-葉綠素-蛋白質復合物,其標記的抗體適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細胞儀;PerCP的最大發射波長為677nm。

              APC(Allophycocyanin)又稱別藻藍蛋白,其標記的抗體適用于配備氦氖激光器發射波長為640nm的多色流式細胞儀;APC最大發射波長為660nm。

              APC-Cy7是由APC和Cy7組合而成的Tandem熒光素;其標記的抗體適用于配備氦氖激光器發射波長為640nm的多色流式細胞儀。

              三 熒光素的選擇

              1 了解流式細胞儀的激光器和通道

              每臺流式細胞儀都配有不同的激光器和通道,做實驗之前首先要了解所使用的流式細胞儀的采用的激光器,每個激光器對應的通道是什么。這樣我們就可以知道這臺流式細胞儀可以使用哪些熒光素。我們之后的抗體也就在這些熒光素中選擇。

              2 熒光素強弱的區別

              每種熒光素的熒光強度都是不同的。見下圖。從下向上,這些熒光素的熒光強度依次增強。

              3 單熒光素的選擇

              單熒光素的意思就是指只染一種帶有熒光素標記的流式抗體。這種情況下,應該遵循的原則就是盡量選擇熒光較強的熒光素。例如 APC,PE等。這主要的原因是,假如我們選擇FITC和PE標記的抗體分別對同一樣本進行染色,結果會發現PE標記的樣本百分比要稍高于FITC標記的樣本。

              4 多熒光組合

              多熒光組合的實驗在熒光素的選擇上優先考慮的是樣本表面或者內部各種抗原表達量的不同。表達高的抗原選擇較弱熒光素標記的抗體,而表達量低的抗原則要選擇強熒光素標記的抗體。例如我們客戶咨詢的CD4,CD25以及Foxp3這三個抗體的選擇。其中,CD4表達量較高,一般可以選擇FITC。而CD25和Foxp3都屬于表達量較少的抗原,那么我們一般推薦的都是PE和APC標記的抗體。

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              下一篇:沒有了發布時間: 2018-02-02

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