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              技術與支持

              SUPPORT

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              熒光抗體染色常見問題及解決方案
              無法標記細胞 1、抗體是否正確保存(4℃避光保存);
              2、抗體是否超過使用期限;
              3、樣品中是否加入了正確的抗體(一抗或二抗);
              4、確??贵w結合了熒光物質。如果抗體未結合熒光染料,確保使用了適當的熒光標記二抗;
              5、確保二抗有活性——是否曾與其它一抗聯合使用?
              6、使用的二抗是否能識別所用一抗;
              7、PE或APC標記的抗體,確保產品未冷存;
              8、確定樣品是否表達要檢測的抗原。建議設一組已知表達該抗原的樣品作為陽性對照;
              9、樣品種屬與抗體是否匹配。
              10、確保使用正確波長的激發光及正確的分析通道。
              熒光強度弱 1、是否過度稀釋抗體。請按照說明書正確稀釋抗體;
              2、間接染色中造成弱陽性的原因可能是前帶效應,即高濃度抗體聚集阻礙特異性抗體和抗原的結合,可能會引起弱的染色結果。解決方法:稀釋抗體;
              3、細胞數過多也會引起弱陽性結果。調整細胞至說明書建議密度;
              4、可能與抗原表達情況有關。請檢查相關文獻以確定抗原表達水平;若抗原表達弱,請選擇熒光強度高的熒光標記抗體;
              5、使用有交叉反應的抗體比特異性抗體更易出現弱陽性結果;
              6、優化一抗和二抗的孵育時間及溫度。
              非特異性染色 1、非特異性染色,可能是由于自發熒光引起的。解決方法:在同樣的檢測條件下,加入空白細胞對照,可得出細胞自發熒光的水平。
              2、選擇CD16/32抗體(產品編號:M10161)封閉Fc受體,可減少抗體和細胞的非特異性結合。
              3、可能是使用二抗引起的非特異性染色。請選擇與檢測組織沒有交叉反應的二抗。
              4、染色后是否充分洗滌。
              5、降低抗體濃度,可減少非特異性染色。
              同一抗體,PE標記染不上,FITC標記的染色結果良好
              1、PE標記的抗體是否被冷存。如果是此種情況,建議購買新抗體;
              2、可能是多聚甲醛固定引起的問題。請使用現配的多聚甲醛或將細胞處理后不經固定盡快分析。
              散射信號異常
              1、盡可能使用新鮮的細胞。散射光信號會顯示出死細胞和
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